TMT定量蛋白质组
TMTTM(Tandem Mass TagTM)技术是由美国Thermo Scientific公司研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用2种、6种或10种同位素的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,然后进行串联质谱分析,可同时比较2组、6组或10组不同样品中蛋白质的相对含量。
TMT试剂由三部分组成:报告基团、平衡基团和反应基团。反应基团形成2—10种等质量同位素标签。TMT试剂标记酶解后的肽段,可与氨基酸N端及侧链的伯胺基团发生反应。在一级谱图中,来自于不同样本的同一肽段,标记后表现为相同的质荷比。在二级谱图中,报告基团、平衡基团和反应基团之间的键断裂,带不同同位素标签的同一肽段产生质量不同的报告离子,根据报告离子的丰度可获得样本间相同肽段的定量信息,再经过软件处理得到蛋白质的定量信息。
技术优势
高通量:可同时对10个样本进行分析,特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间样本的差异蛋白分析。
准确性高:定性与定量同步进行,同时得出鉴定和定量结果,重复样品间的蛋白表达量相关性可达到0.95以上。
兼容性高:标记所有的肽段,包括翻译后修饰,提高了蛋白质组的覆盖率,而且提高了鉴定和定量的可信度。
应用方向
疾病标志物筛选、疾病控制机制、药物作用靶点研究、发育机制研究、产量提高、作用机制研究、植物抗逆、营养吸收机制研究、稀有物种研究、特殊功能蛋白质筛选。
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