Glycosylation Proteomics

细胞内超过 50% 的蛋白质都有一个或多个糖链。连接于天冬酰胺（Asn）残基上的N-糖基化在真核生物中广为存在，也是研究最为深入的一种糖基化形式。

N-糖基化蛋白质组首先对蛋白质进行酶解，随后利用凝集素（lectin）富集N-糖基化肽段，再用N-糖酰胺酶（PNGase）在重水中切除糖链，发生N-糖基化的天冬酰胺残基分子量增加2.989Da，利用质谱可测定分子量是否发生对应的质量偏移，从而检测N糖基化修饰及位点。

O-GlcNAc糖基化是指将单个N乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）分子连接在蛋白质丝氨酸或苏氨酸的羟基氧原子上的一种翻译后修饰，是O-糖基化修饰中一种常见且特别的单糖修饰。 O-GlcNAc参与了代谢相关的多种重大疾病，如肿瘤代谢、心血管代谢、肝脏胰岛素代谢、昼夜节律、感染免疫等。

另外，由于O-GlcNAc 修饰与磷酸化修饰均发生在蛋白质的Ser/Thr残基上，两种修饰间存在着“阴阳”调控关系。发生O-GlcNAc糖基化修饰的丝氨酸/苏氨酸上共价连接单个N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）单糖，其分子量会相应的增加203.08Da。质谱能够精确地测定分子量是否发生相应的质量偏移，实现O-GlcNAc糖基化修饰肽段及位点的分析。
 

为满足研究者除N-糖基化位点定性定量外，对糖型组成分析的需求，特此开发完整N糖肽蛋白质组。完整N糖肽蛋白质组，首先对蛋白质进行酶解，随后ZIC-HILIC富集完整N糖肽，然后通过LC-MS/MS进行检测。最后，通过与蛋白质数据库及糖型数据库进行比对，实现大规模N-糖基化位点的定性定量分析及糖型组成的定性分析。